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Prueba "DETERMINACIÓN DE GRANDES DELECIONES EN APC"

Información Clínica

Las mutaciones germinales en APC están presentes en la poliposis adenomatosa familiar (PAF) clásica y atenuada (OMIM 175100) que es el síndrome polipósico más frecuente y que se hereda con un carácter autosómico dominante. De forma general se caracteriza por presentar de cientos a miles de pólipos adenomatosos intestinales, que aparecen en la tercera o cuarta década de vida. El riesgo acumulado a desarrollar carcinoma colorrectal a los 50 años es del 95% y presenta una penetrancia completa. La edad media de diagnóstico de cáncer colorrectal en los pacientes con este síndrome es de 39 años.

Según la SEOM, para el diagnostico de PAF clásica se debe cumplir al menos uno de los siguientes criterios:

1. Más de 100 pólipos adenomatosos colorrectales.

2. En menores de 20 años, más de 20 pólipos adenomatosos y un progenitor afecto.

 

Para el diagnóstico de PAF atenuada se debe cumplir al menos uno de los siguientes criterios:

1. Más de 15 pólipos adenomatosos colorrectales.

2. Más de 5 pólipos adenomatosos colónicos con edad menor de 60 años e historia familiar de cáncer de colon.

APC es un gen supresor de tumores localizado en la región cromosómica 5q21-q22. Está compuesto por 15 exones y codifica una proteína grande, cuya isoforma más frecuente comprende 2.843 aminoácidos, implicada en procesos de migración y adhesión celular, regulación del ciclo celular e inestabilidad genómica. Los pacientes portadores de una mutación en este gen son susceptibles de una nueva mutación somática que producirá una pérdida de función en la proteína que codifica.

Se han descrito más de 800 mutaciones en línea germinal mayoritariamente en la región central del gen y que resultan en una proteína truncada en el extremo COOH-terminal. También puede haber deleciones exónicas o del gen completo. Alrededor de un 20% de las mutaciones son de novo. Hay dos puntos calientes de mutación (hotspots) en los codones 1.061 y 1.309. La detección de deleciones exónicas o de grandes deleciones no es posible actualmente mediante secuenciación, por lo que se realiza una técnica complementaria para su estudio, el MLPA.

Utilidad Clínica

Diagnóstico de poliposis adenomatosa familiar. El estudio mediante la técnica de MLPA permite la detección de grandes deleciones o duplicaciones y de las dos mutaciones más frecuentes en APC. Está incluido dentro del protocolo de caracterización genética de la poliposis adenomatosa familiar o de la poliposis atenuada. Está recomendado en primer lugar ya que es una técnica más rápida y menos costosa que el estudio por secuenciación del gen.

El estudio molecular de alteraciones el gen APC está indicado en pacientes con poliposis múltiple y CCR, con historia familiar de cáncer de colon polipósico.

Una vez detectada una mutación en línea germinal en un paciente, el estudio está indicado en los familiares directos puesto que la detección temprana de este síndrome en los pacientes portadores no sintomáticos proporciona información para optimizar su manejo clínico y reducir la morbilidad y mortalidad.

Descripción del Método

Se obtiene ADN genómico de la muestra de sangre periférica.

Se estudia de la presencia de grandes deleciones o duplicaciones  y de mutaciones en los codones 1.061 y 1.309 en APC mediante la técnica MLPA (“Multiplex ligation-dependent probe amplification”), utilizando el kit P043 (MRC-Holland).

Para  el estudio se lleva a cabo una hibridación con sondas marcadas con fluorescencia y específicas para cada uno de los exones, así como para regiones cromosómicas próximas y lejanas al gen, que se utilizan como controles. Tras la hibridación se procede a la ligación de las sondas hibiridadas, y posteriormente se realiza una PCR para amplificar las sondas que han hibridado y se han ligado. El producto de la PCR se analiza mediante electroforesis capilar.  En todos los casos se compara el patrón obtenido en el paciente a estudio con el patrón obtenido a partir de ADN de individuos sanos.

La detección de una deleción mediante MLPA se intentará confirmar mediante otra técnica, tal como el análisis a nivel de RNA, en los casos en los que sea factible.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Requisitos de la Muestra

Sangre anticoagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado

Valores de Referencia

No aplica.

Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

Valores críticos...

Interpretación de los Resultados

Los resultados deber ser siempre interpretados en el contexto de otros datos clínicos, patológicos y de historia familiar para determinar la significación de los mismos.

Los resultados se expresan de la siguiente manera:

- No se ha detectado ninguna alteración en los estudios de MLPA.

Los resultados obtenidos revelan la presencia de una deleción. Se indicará el gen y los exones o sondas afectadas.

Tiempo de Respuesta

Entre 3 y 4 meses.

Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Gene reviews. NCBI. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1345/ (APC-associtated polyposis)

MLPA ADN protocol version MDP-v001. MRC-Holland. disponible en www.mlpa.com

McCart et al. A novel exon duplication event leading to a truncating germ-line mutation of the APC gene in a Familial Adenomatous Polyposis family. Familial Cancer (2006) 5:205–208

Michils et al. Large Deletions of the APC Gene in 15% of Mutation-Negative Patients With Classical Polyposis (FAP): A Belgian Study Human Mutation (2005) 25:125-134

Pagenstecher et al. A Complex Rearrangement in the APC Gene Uncovered by Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification Journal of Molecular Diagnostics, 2007; 9:122-126

Pedace et al. Identification of a novel duplication in the APC gene using multiple ligation probe amplification in a patient with familial adenomatous polyposis. Cancer Genetics and Cytogenetics 2008; 182: 130e135

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