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Prueba "KIT: Análisis mutacional"

Información Clínica

El tumor estromal gastrointestinal (GIST) es el tumor mesenquimal más frecuente en el tracto digestivo. La mayoría de los GIST poseen una mutación característica con ganancia de función del gen KIT, que codifica el receptor KIT. En esta enfermedad, KIT y PDGFRA se encuentran mutadas en un ~85% y ~5%, respectivamente.

Muchos tumores además de GIST tienen KIT mutado, incluyendo mastocitosis, melanoma, seminoma, leucemia mieloide aguda, otras neoplasias mieloproliferativos y linfomas. La frecuencia y tipo de mutación varía entre estos tumores así como las implicaciones clínicas que tiene.

Las alteraciones del gen KIT en GIST son de diferentes tipos, pudiendo ser deleciones, inserciones y mutaciones puntuales. Las mutaciones más frecuentes se encuentran en el exón 11 (hasta en un 92% de los casos), seguidas del exón 9 (5-18%), exón 13 (0.8-4.1%) y exón 17 (0.6%) (Tornillo et al. 2006, Eizaguirre et al. 2006). En mastocitosis, más del 90% de los casos tienen una mutación en el exon 17 del gen, que da lugar a la alteración p.D816V, que confiere resistencia al tratamiento con imatinib. En la leucemia aguda mieloide se han descrito mutaciones en el gen KIT en las leucemias asociadas a translocaciones del tipo “core binding factor”, tanto en el exon 17 (p.D816V), como en el exon 8, los más frecuentemente estudiados en LA, pero no se excluye la presencia de mutaciones en otros exones.

Utilidad Clínica

La presencia de mutaciones somáticas en los genes que codifican os receptores tirosina quinasa KIT o PDGFRA pueden servir de apoyo diagnóstico ante la sospecha de GIST. La detección de estas mutaciones puede tener también valor predictivo de respuesta a tratamiento con inhibidores de tirosin quinasa tipo gefitinib, en los tumores GIST metastáticos o irresecables,  y en algunos tipos de melanoma.

Las mutaciones en el gen KIT también se determinan en los pacientes con LAM con presencia de traslocación t(8;21) o inv(16).  El valor pronóstico de la presencia de mutaciones en KIT en estos pacientes sigue en discusión.

En el caso de la mastocitosis sistémica sirve de apoyo diagnóstico.

Descripción del Método

Se prepara ADN genómico de la muestra a estudio.

Se realiza una amplificación mediante PCR utilizando oligonucleótidos específicos que flanquean las regiones exónicas a estudio. Se utiliza un control negativo en cada estudio. El producto de PCR se analiza mediante electroforesis en gel de agarosa. El producto de PCR es secuenciado utilizando uno de los oligonucleótidos con los que se amplificó la muestra.

Mediante esta técnica se puede detectar posibles mutaciones puntuales y pequeñas deleciones o inserciones en este gen mediante secuenciación.  Los cromatogramas de las secuencias se analizan mediante programas informáticos y manualmente para determinar la presencia o ausencia de mutaciones en este gen.

El ensayo para detectar mutaciones mediante secuenciación tiene una sensibilidad analítica teórica del 15-20%.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Requisitos de la Muestra

Biopsia de tejido en fresco: envío inmediato en tubo tipo eppendorf o en suero salino

Biopsia de tejido en parafina: 5 cortes de 5 micras, con indicación de la celularidad tumoral.

Sangre, médula ósa anticoagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado  

Valores de Referencia

No aplica.

Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

Valores críticos...

Interpretación de los Resultados

Los resultados son informados como detección de mutación, ausencia de detección o no valorable. En el caso de detectarse una mutación se incluirá una descripción de la misma a nivel de nucleótido y la descripción de la proteína alterada.

Existen diferencias en cuanto a la respuesta al tratamiento con imatinib entre los individuos con mutaciones en el gen KIT localizadas en exones diferentes. Según el lugar donde se produzca, la mutación afectara a distintos dominios de la proteína y esto se traduce en diferencias en la agresividad del tumor y en la probabilidad de respuesta clínica al imatinib.

Puesto que la frecuencia e implicación de las mutaciones puede ser diferente según su localización en el gen y según la enfermedad de que se trate, los resultados deber ser siempre interpretados en el contexto de otros datos clínicos y patológicos, para determinar la significación de los mismos.

Precauciones

El ensayo funciona de forma óptima en muestras al diagnóstico con importante carga tumoral. La sensibilidad del ensayo no es suficiente para utilizarlo para determinar enfermedad mínima residual durante la terapia, ni confirmatorio de diagnóstico en patologías como la mastocitosis, si el porcentaje de celularidad tumoral es menor del 20%.

Un resultado negativo no excluye la presencia de una mutación que pueda estar presente pero por debajo de los límites de detección del ensayo, o en otros exones no estudiados.

Tiempo de Respuesta

Entre 30 y 50 días laborables.

Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Cammenga J et al. Extracellular KIT receptor mutants, commonly found in core binding factor AML, are constitutively active and respond to imatinib mesylate. Blood (2005): 106: 3958-3961

Kohl TM et al. KIT exon 8 mutations associated with core-binding factor (CBF)–acute myeloid leukemia (AML) cause hyperactivation of the receptor in response to stem cell factor. Blood (2005)  105:3319-3321

Malaise M. et al. Clinical Implications of c-Kit Mutations in Acute Myelogenous Leukemia. Current Hematologic Malignancy Reports 2009, 4:77–82

Paschka P et al.  Adverse Prognostic Significance of KIT  Mutations in Adult Acute Myeloid Leukemia with inv(16) and t(8;21): A Cancer and Leukemia Group B Study. J Clin Oncol (2006) vol. 24: 3904-3911

Rubin BP et al. Gastrointestinal stromal tumour. Lancet (2007) 369: 1731-1741

Tornillo et al. An update on molecular genetics of gastrointestinal stromal tumours. J. Clin. Pathol. 2006; 59:557-563

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