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Prueba "KRAS, NRAS y BRAF: Determinación de mutaciones"

Información Clínica

EGFR es un receptor del factor de crecimiento que se activa por la unión de ligandos específicos, lo que resulta en la activación de la vía RAS/MAPK. La activación de esta vía induce una cascada de señalización que regula un gran número de procesos celulares, incluyendo los relacionados con proliferación celular. Además, la desregulación de la vía RAS/MAPK es un factor clave en la progresión tumoral. Las terapias dirigidas contra EGFR, que inhiben la activación de la vía RAS/MAPK, han demostrado un cierto éxito (aumento libre de progresión y supervivencia global) en pacientes con cáncer colorrectal y cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC).

El cáncer colorrectal es actualmente una de las neoplasias más comunes diagnosticados cada año. Las estrategias que se centran en su detección precoz y prevención reducen eficazmente el riesgo de mortalidad asociada a la enfermedad. Además, se ha observado un aumento en la tasa de supervivencia de pacientes con cáncer colorrectal avanzado como resultado de los avances en agentes quimioterapéuticos estándar y del desarrollo de terapias dirigidas. Los anticuerpos monoclonales contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), tales como cetuximab y panitumumab, representan un nuevo tipo de terapia dirigida para dichos pacientes. Sin embargo, los estudios han demostrado que no todos los individuos con cáncer colorrectal responden a estos tratamientos. Debido a que la combinación de terapia dirigida y la quimioterapia estándar conlleva un aumento de la toxicidad y del coste, las estrategias que ayudan a identificar a los individuos con más probabilidades de beneficiarse de tales terapias dirigidas se han convertido en fundamentales.

Por otra parte, el cáncer de pulmón no microcítico representa el 70% - 85% de todos los diagnósticos de cáncer de pulmón, la principal causa de muerte por cáncer en el mundo. Los estudios aleatorizados han sugerido que las terapias dirigidas, por sí solas o en combinación con quimioterapia, pueden ser beneficiosas para estos pacientes. Al igual que ocurre en cáncer colorrectal, debido al aumento en toxicidad y coste que supone la inclusión de terapias dirigidas en el tratamiento global de pacientes con esta patología, se hacen necesaria la estratificación de pacientes con el fin de identificar aquellos con más probabilidades de beneficiarse del uso de terapias contra EGFR, ya que los estudios han demostrado que no todos los individuos con NSCLC responden a estas terapias.

Una de las alteraciones somáticas más frecuentes en el cáncer colorrectal y de pulmón no microcítico es la presencia de mutaciones activantes en genes que forman parte de la ruta RAS/MAPK, como los proto-oncogenes RAS (KRAS y NRAS), en los exones 2, 3 y 4 y BRAF (alteraciones que producen cambios en el aminoácido del codón 600 (p.V600). La familia RAS es reclutada por EGFR unido a ligando (activo) para iniciar la cascada de señalización inducida por la vía RAS/MAPK. Dado que las mutaciones en RAS o BRAF activan constitutivamente la vía RAS/MAPK en un punto inferior a la intervención de EGFR, los agentes tales como cetuximab y panitumumab, que impiden de unión a ligando del EGFR o los inhibidores de la actividad kinasas de EGFR no tendrían ninguna actividad inhibitoria significativa sobre la proliferación celular en presencia de RAS mutado.

Los datos actuales sugieren que los pacientes con tumores que tienen mutaciones en RAS o BRAF (mutuamente excluyentes) no se benefician de las terapias anti-EGFR. Como resultado, el estado mutacional de estos genes puede ser un marcador útil por el cual los pacientes se seleccionan para terapia anti-EGFR.

Hay que tener en cuenta que no todos los pacientes con RAS/BRAF no mutado responden a las terapias dirigidas anti-EGFR.

Utilidad Clínica

Determinación obligatoria para la toma de decisiones terapéuticas en los pacientes con cáncer colorrectal metastático que vayan a ser tratados con terapias anti-EGFR.

Informativo en otros tumores, tal como en el adenocarcinoma pulmonar, ya que los pacientes que presentan mutación en estos genes no se benefician de terapias anti EGFR.

Hay que tener en cuenta en cualquier caso que no todos los pacientes con RAS/BRAF “no mutado” responden a las terapias dirigidas anti-EGFR, ya que pueden existir alteraciones en otros genes relacionados con la misma vía de activación (por ej. PI3K) que pueden impedir esta respuesta.

Descripción del Método

La metodología de rutina para esta determinación se basa en el sistema Idylla (Biocartis, Bélgica) que analiza la presencia de 39 mutaciones en genes de la familia RAS distribuidas en el exón 2 (codones 12 y 13), exón 3 (codones 59 y 61) y exón 4 (codones 117 y 146) y 5 mutaciones en el codón 600 del gen BRAF mediante el uso secuencial de los kits Idylla KRAS Mutation Assay e Idylla NRAS-BRAF-EGFR S492R Mutation Assay (Biocartis, Bélgica) en un equipo de extracción y análisis de DNA Idylla P0010 (Biocartis, Bélgica). La sensibilidad de la técnica permite la detección de las mutaciones en KRAS si hay al menos un 1% de células con la mutación presentes en la muestra, siendo precisas entre el 1-5% de células con la mutación presentes en la muestra para la detección de las mutaciones en NRAS y BRAF.

El sistema Idylla permite el análisis mutacional directamente desde un corte de muestra embebido en parafina; basado en cartuchos de uso único, la extracción de DNA se realiza en la cámara central de los mismos, siendo luego transferido a cámaras de reacción independientes donde se realiza una PCR cuantitativa a tiempo real basada en la tecnología PlexPrime y PlexZyme. Por un lado, PlexPrime es un sistema que incrementa notablemente la especificidad de amplificación de variantes de una sola base y por otro, PlexZyme se encarga de minimizar aún más la presencia de falsos positivos por señales inespecíficas.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Requisitos de la Muestra

Biopsia, PAAF, BAG en parafina: 5 cortes de 5 micras, con indicación por parte de Anatomía Patológica del porcentaje de celularidad tumoral de la muestra.

Biopsia de tejido en fresco/congelación :10-50 mg de tejido, envío inmediato en tubo tipo eppendorf, con indicación por parte de Anatomía Patológica del porcentaje de celularidad tumoral de la muestra.

Líquidos Biológicos: ascítico, pleural, sinovial, pericárdico: Tubo de plástico sin aditivos, con indicación por parte de Anatomía Patológica del porcentaje de celularidad tumoral de la muestra.

En los casos de muestras de tejido fresco/congelado o líquidos biológicos el sistema precisa la extracción previa del DNA en nuestro laboratorio, siendo este material el que se analiza en el sistema.

Valores de Referencia

Los valores de referencia son intrínsecos a la propia prueba. Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

Valores críticos...

Interpretación de los Resultados

Los resultados indicarán si se ha detectado una mutación en los exones 2, 3 ó 4 de los genes RAS o en el codón p.V600 de BRAF o si no se ha podido detectar ninguna de las mutaciones indicadas previamente.

Observación.

Las determinaciones realizadas con este sistema no permiten conocer exactamente cuál es la mutación sino el cambio que se produce a nivel de aminoácido.

Un resultado negativo no excluye la presencia de una mutación que pueda estar presente pero por debajo de los límites de detección del ensayo. Un resultado negativo tampoco excluye la presencia de otras mutaciones en los genes RAS o BRAF.

Tiempo de Respuesta

Entre 1 y 10 días laborables. Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Andreyev HJ, Norman AR, Cunningham D et al: Kirsten ras mutations in patients with colorectal cancer: the 'RASCAL II' study. Br J Cancer. 2001 Sep 1;85(5):692-6

Cheng L, Zhang S, Alexander R et al: The landscape of EGFR pathways and personalized management of non-small-cell lung cancer. Future Oncol. 2011 Apr;7(4):519-41

Meng D, Yuan M, Li X et al: Prognostic value of K-RAS mutations in patients with non-small cell lung cancer: A systematic review with meta-analysis. Lung Cancer. 2013 Apr 19(13): 124-4

Siena S, Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio F et al: Biomarkers predicting clinical outcome of epidermal growth factor receptor-targeted therapy in metastatic colorectal cancer. J Natl Cancer Inst. 2009 Oct 7;101(19):1308-24

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