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Prueba "PML/RARa: Detección de reordenamiento"

Información Clínica

La leucemia aguda promielocítica (LAP) es una entidad claramente diferenciable del resto de leucemias agudas mieloides, especialmente en lo referido a sus requerimientos terapéuticos específicos. Se caracteriza por la presencia de la translocación t(15;17) que produce el gen de fusión PML-RARa y que, además de ser un marcador clínico para el diagnóstico, se utiliza para la monitorización de enfermedad mínima residual.

Esta translocación implica la fusión del gen PML en el cromosoma 15 y el gen RARA en el cromosoma 17 con los puntos cromosómicos de ruptura 15q22-q24 y 17q11q21. Según la localización del punto de ruptura se producen los subtipos de transcrito bcr1, bcr2 y bcr3, con una frecuencia aproximada del 55%, 5% y 40% respectivamente.

El gen de fusión PML-RARa dispone de una molécula específica, el ácido retinoico todo-trans (ATRA), que actúa sobre la proteína de fusión generada por la translocación. De forma que, aunque los pacientes con LAP tienen un alto riesgo de muerte temprana, la existencia de una terapia específica hace que llegue a la curación un 80% de los pacientes (Lo-Coco et al. 2006).

Utilidad Clínica

La determinación de la presencia de la translocación t(15;17) es adecuada tanto para apoyo diagnóstico como para monitorizar la presencia de enfermedad mínima residual en leucemia aguda promielocítica (LAP).

Una vez determinada la presencia de esta translocación y el tipo de transcrito, se podrá realizar un seguimiento del paciente mediante PCR cuantitativa en tiempo real para determinar la efectividad del tratamiento y prevenir una posible recaída.

Descripción del Método

Se lisan los eritrocitos mediante lisis osmótica. Se prepara ARN y ADN a partir de la muestra y posteriormente se obtiene cADN a partir del ARN.

El método se realiza siguiendo las indicaciones de los protocolos desarrollados por el grupo BIOMED-1 (van Dongen et al 1999). Se realiza una PCR con las condiciones y los oligonucleótidos descritos en el protocolo y preparados de forma manual en el laboratorio. Los productos de PCR se analizan mediante electroforesis en gel de agarosa. Los resultados se interpretan de forma manual. En caso de dudas en la interpretación del tamaño del fragmento amplificado, se realiza secuenciación para verificar la presencia de la translocación.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Requisitos de la Muestra

Sangre, médula ósa anticoagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado

Líquidos Biológicos: ascítico, pleural, sinovial, pericárdico. (Contenedor): Tubo de plástico sin aditivos.

Ganglio linfático / biopsia de tejido en fresco: envío inmediato en tubo tipo eppendorf o en suero salino

Ganglio linfático en parafina: 5 cortes de 5 micras, con indicación de la celularidad tumoral.

Valores de Referencia

No aplica.

Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

....

Interpretación de los Resultados

Los resultados deber ser siempre interpretados en el contexto de otros datos clínicos para determinar la significación de los mismos.

Los resultados se expresan de la siguiente manera:

 - No se observa amplificación de ninguno de los transcritos anteriormente descritos, o

 - Se obtuvo amplificación de un fragmento de un tamaño correspondiente al transcrito resultante de la translocación PML-RARa según está descrito.

Tiempo de Respuesta

Entre 1 y 5 días laborables.

Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Lo-Coco et al. The biology of acute promyelocytic leucemia and its impacto n diagnosis treatment. Hematology Am Soc Hematol Educ Program (2006): 156-161, 514.

Van Dongen et al. Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease. Leukemia (1999) 13: 1901-1928

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