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Prueba "Quimerismo post trasplante hematopoyético"

Información Clínica

Una de las herramientas clínicas más eficaces en el tratamiento de pacientes con enfermedades hematopoyéticas es el trasplante de médula ósea, progenitores hematopoyéticos o cordón umbilical de donantes compatibles. El éxito de esta terapia se estudia mediante monitorización en la sangre del paciente del porcentaje de células de donante y receptor (quimerismo) durante los meses y años posteriores al trasplante.

La valoración del quimerismo se basa en la habilidad de distinguir células del donante y del receptor, siendo la principal herramienta para el estudio del quimerismo el análisis del ADN. Se utilizan zonas conocidas como secuencias polimórficas repetitivas o STR (“Short Tandem Repeats”)) que tienen un alto índice de heterozigosidad y un número elevado de alelos en la población. Estos marcadores permiten distinguir el ADN de dos individuos aunque estén emparentados.

El estudio se realiza mediante PCR puesto que esta técnica aporta suficiente sensibilidad como para detectar material genético de ambos individuos aún cuando la cantidad de uno de ellos esté muy poco representada en la muestra biológica. Esta sensibilidad es aún mayor cuando el estudio se realiza en diferentes linajes celulares.

Utilidad Clínica

Es útil para determinar las cantidades relativas de donante y receptor en una muestra biológica de un paciente trasplantado.

Es un indicador de la efectividad del trasplante. Puede servir como guía en el manejo del paciente y para prevenir un fallo en el injerto o recaída posibilitando la administración oportuna de inmunoterapia adicional.

La sensibilidad del estudio es mayor cuando se realiza en diferentes poblaciones de la sangre periférica. En los pacientes sometidos a trasplante de cordón umbilical, la determinación de quimerismo en médula ósea a los 14 dias post-trasplante ayuda a predecir el éxito o fallo en el injerto.

Descripción del Método

Primeramente se analizan los ADNs del donante y receptor previo al trasplante, y se seleccionan los marcadores informativos para cada pareja donante/receptor, mediante el análisis de secuencias polimórficas repetitivas (STR) utilizando el kit PowerPlex16 HS (Promega).

Para cada análisis de quimerismo postransplante, se fracciona la sangre del paciente trasplantado en un gradiente de Ficoll (LymphoprepTM) y posteriormente se selecciona la fracción de  granulocitos y la de células mononucleadas de cada una de ellas. A partir de las células mononucleadas se obtiene la población CD3+ mediante separación inmunomagnética (CD3 MicroBeads, Miltenyi Biotec) utilizando un instrumento AutoMACs ProSeparator. A continuación se purifica ADN de todas las poblaciones, granulocitos, células CD3+ y resto de células mononucleadas CD3- y se realiza el estudio de secuencias polimórficas mediante PCR utilizando el kit PowerPlex16 HS (Promega). Los productos de PCR se separan mediante electroforesis capilar en un instrumento ABIPrism310 (Applied Biosystems) y se analizan los resultados utilizando el software Genemapper 4.0. En una hoja de cálculo se cuantifican los porcentajes de los marcadores del donante y receptor que hayan sido previamente seleccionados como informativos. Esta cuantificación se realiza esencialmente como describen Thiede et al. 2001.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Para realizar el estudio se necesita previamente muestra biológica del paciente pretrasplante y muestra biológica del donante.

Requisitos de la Muestra

Sangre anticoagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado. Mínimo 4 ml.

Médula ósea anticuagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado. 0,5-2 ml.

Para el estudio previo del receptor y del donante se necesita una mínima cantidad de muestra (sangre 0,5 ml; exudado bucal en tarjeta FTA) 

Valores de Referencia

Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

Valores críticos...

Interpretación de los Resultados

En el informe, los resultados son expresados de la siguiente forma, para cada una de las fracciones celulares analizadas:

Quimerismo completo. Cuando el porcentaje de células del donante es mayor del 95%

Quimerismo mixto. Cuando el porcentaje de células del donante es menor o igual al 95%

Pérdida de injerto. Cuando el porcentaje de células del donante es menor del 5%

La sensibilidad de la técnica es aproximadamente 1-5%.

Tiempo de Respuesta

Entre 3 y 20 días laborables.

Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Antón et al. “Establishment of complete and mixed donor chimerism alter allogeneic lymphohematopoietic transplantation: recommendations from a workshop at the 2001 tandem meetings”. Biology of Blood and Marrow Transplantation (2001) 7: 473-485

Moscardó et al. “Impact of hematopoietic chimerism at day +14 on engraftment alter unrelated donor umbilical cord blood transplantation for hematologic malignances”. Haematologica (2009) 94 (6):827-832

Thiede et al. “Sequential monitoring of chimerism and detection of minimal residual disease alter allogeneic blood steem cell transplantation (BSCT) using multiplex amplification of short tandem repeat-markers”. Leukemia (2001) 15 (2): 293-302

Urbano-Ispizúa et al. “Estudio del quimerismo hematopoyético en el trasplante alogénico de médula ósea”. Haematologica (ed. Esp.) (2004) 89 (1): 65-71

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