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Prueba "TCRG: Detección de reordenamiento (monoclonalidad T)"

Información Clínica

Los genes que codifican los receptores de células T (TCR alfa, beta, gamma y delta) están compuestos por numerosos segmentos codificantes discontinuos, que se reordenan somáticamente durante la maduración del linfocito T, para producir los receptores T de superficie, que son heterodiméricos (alfa/beta , el 90-95% de las células T; gamma/delta, el 5-10% de las células T).  Durante la maduración de los linfocitos T, todos sufren reordenamiento del gen TCRG (gamma) que se mantiene incluso en los linfocitos que finalmente van a expresar los receptores alfa/beta. Por ello, el estudio del reordenamiento del gen TCRG se ha utilizado para la detección de clonalidad linfoide T.

Utilidad Clínica

El gen TCRG está reordenado en más del 90% de las leucemias agudas linfoblásticas T, de los linfocitos grandes granulares T, y de leucemia prolinfocítica T,  y en el 50-75% de los casos de linfoma no-Hodgkin T y micosis fungoides pero no en proliferaciones NK. También está reordenado en una parte de las leucemias agudas linfoblásticas B y mucho menos en los linfomas no-Hodgkin B.

Es útil para determinar si una población de células T es policlonal o monoclonal. Estos estudios se realizan para confirmar el diagnóstico por ejemplo en:

- Cualquier sospecha de proliferación de células T, cuando la morfología  y el inmunofenotipado no son concluyentes.

- Evaluación de la relación clonal entre dos patologías linfoides en un paciente, o discriminación entre una recidiva y una segunda patología.

Descripción del Método

Se prepara ADN genómico de la muestra a estudio.

El método se realiza siguiendo las indicaciones de los protocolos desarrollados por el grupo BIOMED-2 (van Dongen et al 2003). Se preparan grupos de PCR multiplex con las mezclas de oligonucleótidos, conteniendo un oligonucleótido fluorescente, diseñadas por BIOMED2 y preparadas de forma manual en el laboratorio.  Se realizan las PCRs en las condiciones descritas utilizando entre 100 y 300 ng de ADN por mezcla. Los productos da cada grupo de PCR se analizan mediante electroforesis capilar en un instrumento ABIPrism310 (Applied Byosistems) y se analizan los resultados utilizando el software Genemapper 4.0. Los resultados se interpretan de forma manual.

Requerimientos del Paciente

Ninguno en especial

Requisitos de la Muestra

Sangre, médula ósa anticoagulada EDTA (Contenedor): Tubo de tapón morado

Ganglio linfático / biopsia de tejido en fresco: envío inmediato en tubo tipo eppendorf o en suero salino

Ganglio linfático en parafina: 5 cortes de 5 micras, con indicación de la celularidad tumoral.

Líquidos Biológicos: ascítico, pleural, sinovial, pericárdico. (Contenedor): Tubo de plástico sin aditivos.

Valores de Referencia

No aplica.

Se incluirá un informe con la interpretación de los resultados.

Valores Críticos

....

Interpretación de los Resultados

Los resultados deber ser siempre interpretados en el contexto de otros datos clínicos y patológicos, para determinar la significación de los mismos. La interpretación de la presencia o ausencia de un patrón predominante de reordenamiento de TCRG puede ser en ocasiones subjetiva, por lo que se necesita una interpretación en conjunto con el resto de los datos clínicos.

La detección de un patrón de reordenamiento monoclonal mediante esta técnica no siempre es sinónimo de la presencia de una neoplasia clonal. Se pueden producir falsos positivos en el estudio de reordenamiento del gen TCRG cuando el número total de células T en la muestra es limitado, ya que el repertorio de reordenamientos de los segmentos génicos es bastante reducido y puede estar sesgado hacia unos tipos concretos de reordenamientos en algunas condiciones fisiológicas, como la edad, en situaciones post-trasplante, y en reacciones autoinmunes. Por otra parte, se pueden producir falsos negativos por varias razones, tales como el tipo de muestra con escaso número de linfocitos para estudiar, baja cantidad de ADN obtenida de la muestra, o imposibilidad de detección de una pequeña minoría de reordenamientos génicos no amplificables por los oligonucleótidos utilizados.

En algunas ocasiones se detectan resultados difícilmente interpretables, caracterizado por un patrón de reordenamientos anormal (comparado con un típico reordenamiento policlonal T) pero que no llega a ser posible interpretar de forma definitiva como una población monoclonal. En estas situaciones no es fácil distinguir una pequeña subpoblación monoclonal de una población reactiva aumentada. En estos casos el resultado será “no concluyente” y conviene analizar una nueva muestra pasados unos meses si la clínica lo requiere, para confirmar o descartar la presencia de una población monoclonal.

Tiempo de Respuesta

Entre 4 y 20 días laborables. La prueba se realiza una vez a la semana, aproximadamente.

Consultar vía telefónica cuando se necesiten resultados en el menor tiempo posible.

Bibliografía

Van Dongen et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations. Leukemia (2003) 17: 2257-2317

Van Krieken et al. Improved reliability of lymphoma diagnostics via PCR-based clonality testing: Report of the BIOMED-2 concerted action. Leukemia (2007) 21: 201-206

Langerak et al. Polymerase chain reaction-based clonality testing in tissue samples with reactive lymphoproliferations: usefulness and pitfalls. A report of the BIOMED-2 concerted action. Leukemia (2007) 21:222-229

Langerak et al. Euroclonality/BIOMED2 guidelines for interpretation and reporting of IG/TCR clonality testing in suspected lymphoproliferations. Leukaemia (2012) 26: 2159-2171

Bruggemann et al. Powerful strategy for polymerase chain reaction-based clonality assessment in T-cell malignancies. Report of the BIOMED-2 concerted action. Leukemia (2007) 21:215-221

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